Técnicas de Estudio Citológico

Citopatología:

• Citología exfoliativa.
• Citología por PAAF (Punción Aspiración con Aguja Fina).
• Impronta.

• Métodos inmunológicos (histoquímica, microscopía electrónica y cultivos celulares).
• Métodos cuantificadores (citometría de flujo y análisis de imagen).
• Métodos inmunológicos (inmunocitoquímica).
• Métodos de biología molecular (HIS y PCR).

Núcleo Celular

Información sobre las características de benignidad o malignidad celular.

Zona de la célula donde se inician y regulan la mayoría de las actividades celulares.

A tener en cuenta:

• Número: uno, binucleadas o multinucleadas.
• Forma: esféricos, ovalados, lobulados…
• Posición: central o excéntrica.
• Tamaño: relación N/C (1:4-1:6). Cariomegalia (aumento del tamaño del núcleo), anisocariosis (Variación en el tamaño de los núcleos, superior a los valores normales para un determinado tejido, característico de proliferaciones neoplásicas malignas.
• Coloración: cromatina.

Cromatina

• Cantidad: hipercromasia.
• Aspecto: cromocentros, cromatina granular fina, gruesa, compacta…
• Distribución: uniforme, irregular, marginada, corpúsculo de Barr…
• Presencia de nucleolo: cuerpo de 1-3 µm de diámetro.

Alteraciones Nucleares

• Picnosis: retracción y condensación del material cromatínico; núcleos con aspecto de pequeñas masas redondeadas muy teñidas.
• Cariorrexis: rotura de material nuclear en fragmentos irregulares.
• Cariolisis: disolución y desaparición del material cromatínico, solo se observan restos a nivel de la membrana celular.
• Células muertas por regeneración celular: epitelio.
• Células muertas por enfermedad: isquemias, tumores, etc.

Citoplasma

• Parte de la célula que rodea al núcleo y que contiene el resto de los orgánulos intracelulares.
• Separado del medio externo por la membrana plasmática.
• La mayor parte de los elementos del citoplasma no son visibles al MO (microscopio óptico).

Características del Citoplasma a Considerar

• Forma y tamaño: células desprendidas poseen formas y tamaños diferentes (poligonales, redondas…). Tamaño 9-100 µm.
• Reacción tintorial: basófilo o cianófilo, eosinófilo o acidófilo, orangiófilo, anfófilo.
• Presencia de inclusiones: mucina, glucógeno, pigmentos…
• Presencia de especializaciones de membrana: cilios o microvellosidades.

Recursos Tecnológicos

Inmunohistoquímica e Inmunocitoquímica

• Reacción Ag-Ac de moléculas celulares.
• Ag: moléculas celulares.
• Ac: marcado con una enzima.
• Reacción visible por fluorescencia o cromógenos (DAB).
• Ej: VPH inmunodetección p16.

Citometría de Flujo e Imagen

• Citómetros.
• Mide la cantidad celular, cantidad de DNA, tipo celular y aspecto morfológico de las células.
• Fluorocromos (yoduro de propidio) o colorantes (tinción de Feulgen).

Técnicas de Biología Molecular

• Características bioquímicas de los ácidos nucleicos.
• Hibridación in situ: señala secuencias de ácidos nucleicos intranucleares.
• PCR: amplificación de secuencias de ácidos nucleicos.

Idoneidad de la Muestra

Toma de Muestras Cervicovaginales

• Representatividad de la zona.
• Extendidos celulares finos y uniformes y fijación inmediata.
• Muestras sin exceso de sangre.
• Datos de la paciente en el informe (edad, FUR, anticonceptivos…).

Observación Microscópica

• Nivel de conocimientos, fatiga y habituación.
• Revisión aleatoria del 10% de todos los casos informados como negativos.
• Rescreening rápido de todas las citologías negativas a bajo aumento.
• Screening rápido de todas las extensiones.
• Medios automáticos (PAP, Auto Pap…).
• Correlación citohistológica.
• Técnicas de biología molecular.

Clasificación Bethesda

• Objetivos: Mejorar la comunicación entre laboratorios y médicos. Incorporar una evaluación de la idoneidad de la muestra. Simplificar el espectro de lesiones (alto y bajo grado) precursoras de carcinoma de cérvix.

1. Calidad de la Muestra

Satisfactorio para Evaluación

• Etiquetado e información identificativa adecuadas.
• Información clínica relevante.
• Número adecuado de células escamosas bien conservadas y visualizadas.
• Componente adecuado de endocérvix y zona de transformación.

Insatisfactorio para Evaluación

• Muestra devuelta o no procesada (no identificada, rota, etc.).
• Muestra procesada y examinada pero poco fiable para detectar anomalías.

2. Categorización General (opcional)

• Negativa para lesión intraepitelial o malignidad.
• Anormalidad de células epiteliales.

3. Interpretación del Resultado

Negativa para Lesión Intraepitelial o Malignidad

• Con organismos.
• Con otros cambios neoplásicos.
• Cuando no existe anomalía de células epiteliales.
• Lesiones infecciosas → advertencia, NO DIAGNÓSTICO.

Anormalidades de Células Epiteliales

• Células escamosas atípicas (ASC).
• Células glandulares.
• ASCUS.
• ASCH.
• SIL.
• L-SIL.
• H-SIL.
• AGC.

4. Revisión Automatizada, Pruebas Auxiliares

• Sugerencias.

Terminología

• ASCUS: células escamosas atípicas de significado incierto.
• ASCH: células escamosas atípicas sugestivas de lesión intraepitelial.
• AGC: células glandulares atípicas (endocervicales, endometriales).
• L-SIL: lesión escamosa intraepitelial de bajo grado.
• H-SIL: lesión escamosa intraepitelial de alto grado.