Purga del material de laboratorio

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Una fase importante de la Microbiología es el conocimiento de los métodos para destruir, inhibir o eliminar microorganismos. Debido a la existencia de diferentes tipos de microorganismos, éstos varían según la facilidad con que puedan ser destruidos, eliminados o inhibidos y además como pueden encontrarse en lugares tan variados (agua, ropa, medio ambiente, alimentos, etc), los métodos para su eliminación también tienen que ser diferentes.

Dentro de la utilidad de éstos métodos de control del crecimiento microbiano podemos citar :

Prevenir la infecciones. Evitar la descomposición de los alimentos. Evitar la interferencia de microorganismos contaminantes en los procesos industriales. Prevenir la contaminación de materiales empleados en las prácticas microbiológicas e investigativas. En muchas otra ocasiones donde se necesite trabajar con material desinfectado o estéril.

CONCEPTOS Básicos :

Estéril : Libre de toda forma de vida.

Séptico

Presencia de microorganismos patógenos en los tejidos vivos.

Aséptico

Ausencia de microorganismos patógenos en los tejidos vivos.

Antiséptico

Sustancia química que tiene la propiedad de inhibir el crecimiento y desarrollo do los microorganismos sobre los tejidos vivos.

Desinfección

Eliminación de microorganismos que se encuentran en el ambiente, objetos y superficies inanimadas mediante la acción de desinfectantes.

Desinfectante

Sustancia química que tiene la propiedad de destruir microorganismos o inhibir su crecimiento y desarrollo en medios inanimados.

Según su acción bacteriana los desinfectantes pueden ser :


Bacteriostáticos

Tienen la propiedad de detener su crecimiento inhibiendo su multiplicación y reproducción pero éstas se reanudan en cuanto se retira el agente, o sea, tienen acción reversible.

Bactericidas

Agentes que matan a las bacterias de forma irreversible.

Niveles de actividad antimicrobiana de los desinfectantes :

Se establecen tres niveles de acción microbicida.

Desinfectantes de bajo nivel :

Sólo actúan sobre las formas vegetativas de las bacterias y virus con envoltura lipídica, no actúan sobre el Micobacterium tuberculosis, virus con envoltura proteica ni esporas bacterianas. Ejemplos : Amonio Cuaternario, Clorhexidina, Sales de plata, Biguadinas, etc.

Desinfectantes de nivel intermedio :

Actúan sobre formas vegetativas bacterianas, hongos, levaduras, Micobacterium tuberculosis, virus con envoltura proteica y lipídica pero son inactivos contra esporas bacterianas. Ejemplos : Yodo y yodóforos, cloro y liberadores de cloro, fenol y derivados, etc.

Desinfectantes de alto nivel :

Se diferencian de los demás por inactivar esporas, ésto los convierte en potenciales esterilizantes en frío. Ejemplos: Oxido de etileno, Formaldehído, Glutaraldehido, Formaldehído + alcohol, Peróxido de hidrógeno, etc.

Clasificación DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS :

 

AGENTES Físicos :

 1)

CALOR


Seco

Flameado. Incineración. Pausterización. Horno.

Húmedo :

Ebullición en agua. Vapor libre (Tindalización). Autoclave. 2)

Filtración

Existen diferentes tipos de filtros: Filtros Chamberland de porcelana fina no vitrificada. Filtros Seitz de asbesto. Filtros de membrana (Millipore), de acetato de celulosa poros desde 1 a 0,005 micras. 3)

RADIACIONES

Pueden ser de dos tipos: a) Ionizantes : Mediante Rayos X, Rayos Gamma, Rayos de e de alta velocidad, Rayos catódicos, Rayos beta, etc. B) No ionizantes : Radiaciones ultravioleta (Lámparas Germicidas y Campanas de Flujo Laminar). 4)

CONSERVACIÓN

(BAJAS TEMPERATURAS). A) Refrigeración. B) Congelación. D) Liofilización. E) Desecación. f) Plasmolisis, etc.

B) AGENTES Químicos :

Alcoholes (etílico e isopropílico a concentraciones entre el 70% y 90%). Fenoles (Cresoles y bifenoles a concentraciones del 1 al 2% acuoso). Iones de metales pesados (Sales de Mercurio y de plata). Derivados del Furano (Nitrofurazona, Furazolidona y Nitrofurantoina). Colorantes (Azul de metileno, Violeta Genciana, Tripaflavina, etc). Detergentes y jabones (Pueden ser aniónicos o catiónicos). Gases (Oxido de etileno, Formaldehído, Formol, etc). Agentes oxidantes (Peróxido de hidrógeno, permanganato de potasio). Halógenos (Cloro, Bromo, Yodo y sus sales). Álcalis (Hidróxido de potasio, de sodio, de litio, de amonio, etc). Ácidos (Ácido nítrico, sulfúrico, bórico, etc). CarácterÍsticas de un desinfectante ideal (Alto coeficiente de desinfección, estabilidad, solubilidad, poca toxicidad para el hombre o animales, no corrosivo, sin acción decolorante, alto poder de penetración, barato, de fácil aplicación, acción desodorante). En la siguientes tablas se resumen los antiséticos y desinfectantes más usados.

Descripción de las principales Técnicas es Esterilización que usarás en los

Laboratorios de Microbiología


CAMPANA DE FLUJO LAMINAR

Esteriliza el aire en la zona de la campana por radiación UV.

Instrucciones para su uso:

Desinfectar todas las superficies interiores con una solución alcohólica al 70%. Encender el flujo de aire y la luz UV por 20 minutos antes de trabajar en la campana.

NO MIRAR LA LUZ UV NI TRABAJAR MIENTRAS ESTE ENCENDIDA

El laboratorio debe tener todos sus accesos cerrados mientras trabajes con la campana para evitar corrientes de aire contaminado. Apague la luz UV y trabaje con el flujo de aire encendido. Recuerde que todos sus materiales de trabajo deben estar en las condiciones más estériles posible, limpie todas las superficies que pueda con la solución alcohólica, incluya sus manos. Una vez que termines, apague el flujo y limpie todas las superficies usadas. 5)  Evite tener materiales en exceso dentro de la campana lo que causaría una disminución en el poder esterilizante de ésta.

HORNO

(CALOR SECO) Es un aparato metálico en forma de cámara cerrada cuadrada o rectangular cuyas paredes se fabrican dobles o protejidas con amianto para evitar la pérdida de calor.
En la parte superior se encuentra el termómetro que registra la temperatura interior. Además tiene un tubo a manera de chimenea con una lámina obsturadora para graduar el tiro del aire y que, por tanto permite cierto control de la temperatura. La fuente de calor se encuentra generalmente en el fondo del aparato y es generada por una resistencia eléctrica que distribuye el calor en forma uniforme impulsado por un ventilador a fin de lograr una esterilización segura mediante calor seco, se requieren 160ºC a 180ºC durante una o dos horas, con ello se consigue la carbonización de los constituyentes celulares. 

Funcionamiento:

1 – Situar el material limpio y seco retapado en el interior del horno frío. 2 – Cerrar la puerta. 3 – Encenderlo. 4 – Observe el termómetro hasta que marque la temperatura deseada. 5 – Mantener dicha temperatura durante una o dos horas. 6 – Apague el horno y no lo abra hasta que se enfríe.

Usos:

Aunque cada día se utiliza menos por lo demorado del proceso y el alto consumo de electricidad, sigue siendo útil para algunos materiales que resisten altas temperaturas. Materiales de vidrio especiales (PIREX), como Placas de Petri, pipetas, beakers, erlenmeyer,instrumentos metálicos, etc. No utilizar para líquidos o sustancias evaporables, ni ninguna que se deteriore por la temperatura (hay algunas sustancias como la vaselina, grasas y parafina que sí se pueden esterilizar en el horno). Para asegurarnos que la esterilización estuvo correcta se debe colocar en los paquetes a esterilizar un control químico de esterilización especial para hornos el cual debe cambiar de color ante una correcta esterilización.

AUTOCLAVE

(VAPOR A Presión). Un autoclave consiste en una cámara cilíndrica en la que se introduce vapor de agua a presión superior a la atmosférica. Combina temperatura, vapor y presión lo que garantiza una óptima esterilización. Por lo general consta de dos cilíndros concéntricos, cuyo espacio intermedio (camiseta), se llena de vapor. Los objetos a esterilizar se colocan en el interior de la cámara. Tras asegurar muy bién la puerta, se permite la entrada de vapor a la cámara central. Al usar el autoclave es importante que la corriente de vapor desplace el aire antes de que aumente la presión, para esto se deja la llave de escape abierta hasta que comience a salir vapor de agua caliente, en ese momento se cierra hasta que se alcace la presión, cuando el vapor se halla mezclado con aire, la temperatura viene determinada por la presión parcial del vapor de agua. Por ejemplo el vapor puro a 15 libras de presión de 1Kg/cm2 tiene una temperatura de 121ºC. Si el vapor está mezclado con una cantidad igual de aire a la misma presión la temperatura es sólolamente 110ºC. El vapor hidrata y provoca así la coagulación de las proteínas, el aire nó. El vapor de agua también producirá hidrólisis a temperaturas de autoclave, el aire seco no puede hacerlo a ninguna tempertura. El termómetro de autoclave es la guía más importante en el proceso de esterilización y no el manómetro. Sin embargo, éste último, así como el escape del vapor o válvula de seguridad, son escenciales. Cuando el período de esterilización ha llegado a su fín se interrumpe la entrada de vapor a la cámara. La estructura se enfría por pérdida de calor a través de la puerta no aislada, con lo que la presión de vapor también decae. La humedad de la estructura se evapora en proceso acelerado por el calor de vapor retenido en la cámara aislante. La práctica común de esterilización mediante autoclave consiste en exponer los materiales a una temperatura de 121ºC durante 15 minutos a 1 atmósfera (15 libras) de presión. Conviene disminuir la presión lentamente después de terminada la esterilización pues los líquidos sobrecalentados pueden hervir y derramarse. Las grandes masas sólidas exigen un tiempo de calentamiento más prolongado para permitir la penetración del calor. Los paquetes deben colocarse quedando espacios entre ellos a fin de permitir la circulación del vapor caliente.

FUNCIONAMIENTO:

1 – Envuelva correctamente el material a estilizar en papel kraft y coloque un contol químico de esterilidad para autoclave dentro y fuera de cada paquete. 2 – Asegúresé de que tiene agua suficiente, si tiene que agregarle recuerde que debe ser agua destilada. 3 – Coloque el material a esterilizar en la cámara sobre la rejilla metálica tratando que no toque la paredes ni el fondo de la cámara y dejando espacios entre los paquetes. 4 – Cerrar la tapa apretando los tornillos transversalmente. (Asegúresé que quedó bién cerrada). 5 – Enciéndalo. 6 – Cerrar la llave de escape cuando salga vapor en vez de aire. 7 – Observar el termómetro y el manómetro hasta obtener la temperatura y presión deseada. 8 – Mantener presión y temperatura constante por 15 minutos. 9 – Apagarlo y dejar que baje la presión. 10 – Abrir lentamente la llave de salida del vapor, aflojar los tornillos igual que los apretó y abrir el autoclave nunca de frente a usted. 11 – Observe los controles de esterilidad, si el material esta mojado debe ser reempacado y vuelto a esterilizar.

USOS:

Para todo material que no sea degradable por calor y humedad, así es útil para cristalería, medios de cultivo, papel, algodón, gasa, residuos contaminantes de desechos (si esteriliza desechos una vez terminado debe desinfectar por dentro el autoclave). Los frascos con tapas de rosca se les debe aflojar la tapa y los tapados con algodón deben tener retapas de papel kraft o aluminio. Como hemos visto, el método más comúnmente empleado para destruir los microorganismos es el calor. El calor no es sólamente el agente de esterilización más ampliamente utilizado y el más eficaz, sino también el más económico y el más fácil de contolar. En la esterilización por calor debe tenerse en cuenta el grado de resistencia de los microorganismos a la temperatura, la resistencia al calor varía entre los diferentes microorganismos como se puede apreciar en la siguiente lámina:

Estas diferencias pueden ser expresadas a través de los siguientes conceptos:


PMT (punto de muerte térmica)

Es la temperatura más baja requerida para matar todos los microorganismos de una suspensión líquida en 10 minutos.

TMT (tiempo de muerte térmica)

Es el menor tiempo necesario para que todas las bacterias de un cultivo líquido mueran a una temperatura determinada.

TRD ó valor D (tiempo de reducción decimal)

Es esencialmente útil en la indutria de conservas enlatadas y no es más que el tiempo (en minutos) en que se destruye el 90% de la población bacteriana a una temperatura determinada.

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