Medios de cultivo mejorados

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5.- COMPONENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

La gran diversidad de mundo microbiano hace que los medios de cultivo sean muy variados, pero en general todos contienen como componentes principales los siguientes: Agua,  fuente  de  carbono  y  energía,  fuente  de  nitrógeno,  fósforo,  azufre,  sales minerales… Etc. Algunos pueden llevar factores orgánicos de crecimiento, colorantes, agentes tamponantes, agentes solidificantes etc.

Agua


– Preferiblemente destilada, pues su pH es neutro y está exenta de cationes, Ca  y Mg que pueden precipitar con los fosfatos u otros componentes durante el proceso de esterilización.

Peptonas


– Son productos resultantes de la hidrólisis ácida o enzimática de proteínas vegetales o animales.

Extracto de carne


– Es un concentrado de productos hidrosolubles de la carne.

Extracto de levadura


– Se obtiene por hidrólisis de células de levadura.

Carbohidratos


–  Utilizados  como  fuente  de  carbono  y  energía,  como  la  glucosa, lactosa, almidón)

Sangre

Sales biliares


– Inhiben el crecimiento de los Gram +

Indicadores de pH


– Como el rojo de fenol y el azul de bromotimol.

Componentes inorgánicos.
Como el ClNa, fosfatos, sulfatos, nitratos. Los fosfatos como solución tampón.

Gelatina


– Es una proteína procedente del colágeno.

Agar


– Se utiliza como agente solidificante, es un polímero de naturaleza polisacarídica que se obtiene de las algas rojas.

6.-CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Según su estado físico:


Líquidos


– Aquellos que no llevan agentes solidificantes.

Sólidos


–  Aquellos  que  contienen  agentes  solidificantes,  generalmente  agar,  en  una proporción de 15 a 20g/l.

Semisólidos


– Contienen agentes solidificantes pero en una proporción menor. Ej el medio
O/F

Según su composición química




Medios indefinidos


– Son aquellos que se desconoce su composición química precisa.

Medios definidos

– Se conoce de forma exacta su composición química cualitativa y cuantitativa.

Según su finalidad o uso:


Medios para aislamiento específico



–  Medios  enriquecidos

–  Contienen  además  de  los  nutrientes  usuales  otros compuestos como factores de crecimiento. Ej. Agar chocolate, soja , triptona etc


-Medios de enriquecimiento

– Son medios líquidos. Favorecen el crecimiento de algún tipo de bacterias que se encuentran en forma minoritaria sobre la base de alguna carácterística física o química. Ej. Caldo selenito que se utiliza para aumentar el número.Tioglicolato


-Medios selectivos

– Son aquellos que contienen una determinada sustancia que inhibe el crecimiento de algunas bacterias, pero permite el de otras. Ej. El Mac Conkey.

–  

Medios diferenciales

– Son aquellos en cuya composición existen algunas sustancias que permiten poner de manifiesto una determinada actividad bioquímica de la bacteria cultivada. Ej. El Kligler.

Medios ordinarios para crecimiento en general-


Son aquellos que permiten el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos (pero no de aquellos con exigencias particulares) como el agua de peptona.

Medios de multiplicación


.– Son aquellos que permiten un máximo de aumento celular en un mínimo de tiempo. Son medios utilizados en la industria para la preparación de vacunas, antibióticos etc.

Medios de transporte


– Son aquellos que mantienen en estado viable, aunque sin reproducción  los  microorganismos  presentes  en  una  muestra.  Ej.  El  medio  Amies, Stuart.

Según su presentación:


Medios deshidratados o liofilizados


-Son aquellos que viene en polvo, y se preparan añadiendo agua en cantidad adecuada .

Medios sólidos en placa de Petri. Medios sólidos en tubo


Ej Kligler.

Medios líquidos en tubo


Ej. Prueba de Indol

Medios semisólidos en tubo


Ej Prueba O/F.

Medios  de  doble  fase  en  frasco


Contiene  una  fase  sólida  y  otra  líquida.  Ej

Determinación rápida de microorganismos en sangre.

9.- ALMACENAMIENTO    Y CONSERVACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios deshidratados deben de almacenarse en lugar fresco y seco y al abrigo de la luz directa del sol, aunque hay varias excepciones que exigen una temperatura de almacenamiento de 2 a 8ºC  (base de caldo selenito)

En la manipulación de los frascos se debe procurar que las aperturas y cierres sean las menos posibles y que el tiempo durante el cual el frasco permanece abierto sea mínimo. De lo contrario se irá rehidratando, con lo que comenzará a apelmazarse y endurecerse. Incluso podría llegar a tener un crecimiento bacteriano en superficie, en cuyo caso se debe desechar.

Lo más recomendable es preparar el medio cuando se va a emplear, aunque en muchos casos es imposible. El tiempo de vida del medio preparado dependerá de la propia naturaleza del medio, de la hermeticidad de los recipientes que lo contienen, de la temperatura de conservación y de las condiciones medioambientales. Si la hermeticidad es buena y la temperatura de 2ª a 8º la vida del medio puede ser de 4 a 6 semanas. Las placas petri deben almacenarse en bolsas de plástico e invertidas para evitar la evaporación excesiva de la humedad, y deben ser microporosa para evitar la excesiva condensación de agua que podría ser causa de alteración del medio

Cuando es necesario refundir el medio hay que hacerlo al baño- maría hirviente. Nunca se debe aplicar calor directo

En  algunos  casos,  como  los  medios  para  anaerobios,  la  conservación  es  mejor  a temperatura ambiente que en frigorífico.

10-DESTRUCCIÓN INOFENSIVA DE CULTIVOS

Se puede llevar a cabo de tres maneras diferentes:

* El método mas sencillo para placas de petri de vidrio, consiste en cubrir totalmente la superficie con una solución desinfectante, dejándolo actuar durante 6 horas como mínimo.

*Se  puede  esterilizar  por  autoclave,  sometiendo  posteriormente  el material a la limpieza ordinaria

*La   incineración   (cremación)   es   un   método   adecuado   para   la destrucción de material contaminado, cuando este sea desechable.

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