Sección I: Bioseguridad, Riesgos y Protocolos de Laboratorio
¿Qué es la microbiología según el documento? Es la ciencia que estudia y analiza los microorganismos: bacterias, hongos, protistas y parásitos, así como otros agentes.
¿Cuál es el objetivo principal de un laboratorio de microbiología? Identificar, aislar y estudiar microorganismos presentes en una muestra.
¿Qué normativa española regula la protección de los trabajadores frente a riesgos biológicos? El Real Decreto 664/1997 sobre riesgos biológicos.
¿En qué consiste el proceso de «limpieza» en el laboratorio? Consiste en reducir el número de microorganismos. Los métodos incluyen la limpieza manual, por ultrasonidos y mecánica.
Menciona los tres métodos de limpieza usados en un laboratorio. Los métodos principales son: manual, mecánica y química (usando agentes como etanol al 70 % o al 90 %, alcohol o lejía).
¿Cuál es el objetivo de la «desinfección»? La destrucción de las formas vegetativas de los microorganismos, excepto las esporas. Se realiza mediante métodos físicos o químicos.
¿Qué diferencia hay entre desinfección y esterilización? La desinfección no elimina todas las formas de vida; la esterilización sí elimina todas las formas de vida, incluidas las esporas.
¿Qué es un desinfectante? Sustancias químicas capaces de destruir en 10-15 minutos los gérmenes depositados sobre un material inerte o vivo.
Nombra tres tipos de desinfectantes según su lugar de acción.
Por coagulación del citoplasma: clorhexidina.
Por acción sobre los ácidos nucleicos: acridina.
Por acción sobre los grupos tioles de la membrana: cloruros, yoduros.
¿Qué métodos de esterilización por calor existen? Calor seco (ej. horno Pasteur) y calor húmedo (ej. autoclave).
¿Cuáles son las condiciones estándar para esterilizar medios de cultivo en autoclave?
Medios de cultivo, líquidos e instrumentos: 121 ºC durante 15 minutos.
Desechos médico-infecciosos: 132 ºC durante 30 a 60 minutos.
¿Cómo se clasifican los microorganismos del Grupo de Riesgo I? Microorganismos sin riesgo individual ni comunitario. Ej. Bifidobacterias.
Define brevemente el Grupo de Riesgo III de microorganismos. Microorganismos que pueden causar una enfermedad grave en el ser humano y presentar un peligro para la población. Ej. Mycobacterium tuberculosis (Tuberculosis).
¿Qué ejemplo de patógeno se asocia al Grupo de Riesgo IV? Patógenos que causan enfermedades graves y que pueden ser rápidamente transmitidos. Ej. Virus Ébola.
¿Qué niveles de bioseguridad existen para los laboratorios?
Nivel 1: Laboratorios de enseñanza.
Nivel 2: Los más comunes (diagnóstico primario).
Nivel 3: Laboratorios de diagnóstico especial y laboratorios de investigación.
Nivel 4: Laboratorio de contención máxima.
¿Qué tipos de cabinas de seguridad biológica existen?
Clase I: No garantiza la protección del producto.
Clase II (Tipo A o B): Protegen al operario, al producto y al ambiente.
Clase III: Laboratorio de contención máxima.
Además de los riesgos biológicos, ¿qué otros riesgos se identifican en el laboratorio?
Químicos: Sustancias químicas.
Físicos: Aparatos, ruido.
Radiactivos: Isótopos radiactivos.
Ergonómicos: Postura, cargas, ruidos.
Psicosociales: Comunicación, gestión del tiempo.
¿Dónde deben estar ubicadas las fichas de seguridad de los reactivos químicos? En un lugar visible y accesible. Deben incluir los protocolos de emergencia a seguir para cada reactivo en particular y los primeros auxilios dependiendo de la vía de entrada al organismo.
¿Está permitido salir del laboratorio con el uniforme o el Equipo de Protección Individual (EPI)? El personal de laboratorio no tiene permitida la salida del área de trabajo ni con el uniforme de trabajo ni con los EPI necesarios para desarrollar su labor con seguridad.
¿A qué grupo de residuos pertenecen los «residuos citostáticos»? Pertenecen al Grupo VI (Residuos especiales). La clasificación general es:
Grupo I: Residuos asimilables a urbanos.
Grupo II: Residuos sanitarios no específicos.
Grupo III: Residuos sanitarios específicos.
Grupo IV: Cadáveres y restos humanos.
Grupo V: Residuos químicos.
Grupo VI: Residuos citostáticos.
Grupo VII: Residuos radiactivos.
Sección II: Clasificación, Estructura y Observación Microbiana
¿Quién fue la primera persona en observar microorganismos y qué nombre les dio? Antonie van Leeuwenhoek fue la primera persona en observar microorganismos. Los llamó animálculos.
¿Cuáles son los principales tipos de microorganismos mencionados en la unidad? Bacterias, virus, hongos, protozoos y algas microscópicas.
¿Qué caracteriza a los virus en cuanto a su estructura y reproducción? Son acelulares (no están formados por células). Su estructura básica consiste en material genético (ADN o ARN) rodeado por una cápside proteica. En cuanto a su reproducción, no pueden reproducirse por sí mismos; solo lo hacen dentro de una célula huésped.
¿Qué diferencia principal hay entre una célula procariota y una eucariota? Las procariotas no tienen núcleo verdadero ni orgánulos membranosos; las eucariotas sí los poseen.
Menciona las tres formas o morfologías básicas de las bacterias. Cocos (esféricas), bacilos (forma de bastón) y espirilos (forma espiral), incluyendo también los vibrios (forma de coma).
¿Qué es el peptidoglicano (o mureína) y dónde se encuentra? Es un polímero estructural que da rigidez y forma a la bacteria, y se encuentra en la pared celular bacteriana.
¿En qué se diferencia la pared celular de una bacteria Gram positiva de una Gram negativa? Las Gram positivas tienen una capa gruesa (50-80 %) de peptidoglicano y no poseen membrana externa; las Gram negativas tienen una capa delgada (10 %) de peptidoglicano y una membrana externa rica en lipopolisacáridos.
¿Para qué sirven los flagelos y las fimbrias en las bacterias? Los flagelos permiten el movimiento (motilidad); las fimbrias facilitan la adhesión a superficies y tejidos.
¿Qué función tienen las endosporas bacterianas? Permiten la supervivencia de la bacteria en condiciones ambientales desfavorables, ya que son estructuras de resistencia.
Explica las cuatro fases del crecimiento bacteriano.
Fase de latencia: Adaptación al medio.
Fase exponencial: Rápida multiplicación.
Fase estacionaria: Equilibrio entre división y muerte.
Fase de declive o muerte: Disminución del número de bacterias viables.
¿Qué es la taxonomía en microbiología? La taxonomía es la ciencia que se encarga de la clasificación de los seres vivos, estableciendo las semejanzas entre grupos, llamados taxones.
¿Cómo se escribe correctamente el nombre científico de un microorganismo según la nomenclatura binominal? Con dos palabras en latín: el género con mayúscula inicial y la especie en minúscula, ambos en cursiva (Ej. Escherichia coli).
¿Para qué se utiliza el aceite de inmersión en microscopía? Para aumentar la resolución y nitidez de la imagen al usar el objetivo de 100×.
¿Qué es un examen en fresco? Es la observación microscópica de la morfología, la movilidad y la disposición in vivo de la muestra en una gota de líquido.
¿Cuál es el objetivo principal de realizar una tinción? Aumentar el contraste para facilitar la observación y diferenciación de estructuras celulares.
¿Qué es el «mordiente» en una tinción y cuál es el más común? Es una sustancia que fija el colorante a la muestra; el más común es el yodo (lugol).
Explica brevemente los pasos de la Tinción de Gram. Aplicación de cristal violeta, luego lugol (mordiente), decoloración con alcohol o acetona y contratinte con safranina.
¿De qué color se ven las bacterias Gram positivas y las Gram negativas tras la tinción? Gram positivas: violetas o moradas. / Gram negativas: rosadas o rojas.
¿Para qué tipo de bacterias se utiliza la tinción de Ziehl-Neelsen? Para bacterias ácido-alcohol resistentes, como las del género Mycobacterium.
¿Qué técnica de tinción se utiliza específicamente para ver esporas? Se utilizan el Método de Wirtz (colorante: verde malaquita) y el Método de Moeller (colorante: carbol fucsina).
Sección III: Medios de Cultivo y Nutrición Microbiana
¿Qué es un medio de cultivo? Solución que contiene los nutrientes necesarios para permitir el crecimiento de microorganismos, en condiciones favorables de pH y temperatura.
¿Cuáles son los componentes básicos (macroelementos) que aportan carbono, nitrógeno y azufre?
Carbono: Se aporta generalmente mediante carbohidratos (glucosa, lactosa), ácidos orgánicos o CO₂.
Nitrógeno: Proviene de sales de amonio, nitratos, aminoácidos o peptonas.
Azufre: Se obtiene de sulfatos, sulfuros o de aminoácidos azufrados como cisteína y metionina.
¿Qué función tienen los «factores de crecimiento» como las vitaminas o aminoácidos? Actúan como cofactores esenciales para reacciones metabólicas. Son necesarios para microorganismos que no pueden sintetizarlos por sí mismos y deben obtenerlos del medio.
¿Qué es el Agar-Agar y para qué se utiliza en los medios de cultivo? Es un polisacárido extraído de algas rojas que se utiliza como agente solidificante. No es degradado por la mayoría de los microorganismos y permite obtener medios sólidos para observar colonias.
¿Qué son las peptonas? Son mezclas de péptidos y aminoácidos obtenidas por la digestión parcial de proteínas. Constituyen una fuente rica de nitrógeno, carbono, vitaminas y minerales.
¿Para qué sirven los sistemas amortiguadores o «tampones» en un medio? Sirven para mantener estable el pH del medio, evitando cambios bruscos que puedan inhibir el crecimiento microbiano como consecuencia del metabolismo.
¿Cuál es la diferencia entre un medio sintético (definido) y uno complejo (indefinido)?
Medio sintético o definido: Su composición química es conocida con exactitud.
Medio complejo o indefinido: Contiene componentes como extractos o peptonas cuya composición exacta no se conoce.
¿Cómo se clasifican los medios según su consistencia física?
Líquidos: No contienen agente solidificante.
Semisólidos: Contienen baja concentración de agar.
Sólidos: Contienen una mayor concentración de agar u otro solidificante.
¿Qué es un medio de enriquecimiento? Es un medio que favorece el crecimiento de un microorganismo particular al aportar nutrientes adicionales o condiciones específicas, sin inhibir de manera significativa a los demás. Ej. Agar sangre.
¿Qué caracteriza a un medio selectivo? Se caracteriza por contener sustancias que inhiben el crecimiento de ciertos microorganismos y permiten el desarrollo de otros específicos. Ej. Agar Gardnerella.
¿Para qué sirve un medio diferencial? Sirve para diferenciar grupos de microorganismos en función de reacciones bioquímicas visibles (Ej. fermentación de azúcares).
Menciona los pasos generales para preparar un medio de cultivo deshidratado.
Pesar la cantidad indicada del medio deshidratado.
Disolverlo en el volumen correspondiente de agua destilada.
Calentar si es necesario hasta su completa disolución.
Ajustar el pH si se requiere.
Esterilizar en autoclave.
Enfriar y dispensar en recipientes estériles.
¿A qué temperatura y presión suele esterilizarse un medio de cultivo en el autoclave? Generalmente a 121 ºC, con una presión aproximada de 15 lb/pulg² durante 15 minutos.
¿Qué es el enriquecimiento selectivo y cita un ejemplo de medio? Es una técnica que favorece el crecimiento de un microorganismo específico mientras inhibe la flora acompañante mediante agentes selectivos. Ejemplo: Caldo selenito, utilizado para el aislamiento de Salmonella.
¿Qué aporta el Agar Sangre al crecimiento bacteriano? Aporta factores nutritivos adicionales como proteínas, hemina y cofactores. Favorece el crecimiento de patógenos determinados (ej. estreptococos) y permite la observación de patrones de hemólisis.
¿Para qué se utiliza el Agar Chocolate? Se utiliza para el cultivo de bacterias exigentes como Haemophilus, ya que contiene sangre lisada que libera los factores X y V.
¿Qué tipo de bacterias crecen en el Agar MacConkey? Principalmente bacterias Gram negativas (Enterobacterias). Además, permite diferenciar las bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.
¿Qué microorganismo se busca identificar principalmente con el Agar Chapman (Manitol Salado)? Se utiliza para la identificación de Staphylococcus (Gram positivas), debido a su capacidad de fermentar el manitol en un medio con alta concentración de sal.
¿Cuál es la utilidad del medio Sabouraud? Se utiliza para el aislamiento y cultivo de hongos y levaduras (incubación a 30 ºC). Su pH ácido inhibe el crecimiento de muchas bacterias.
¿Qué es un medio de transporte? Medio diseñado para conservar la viabilidad de los microorganismos durante el traslado de la muestra al laboratorio, evitando su multiplicación o muerte sin permitir un crecimiento significativo.
Sección IV: Procesamiento de Muestras, Siembra y Recuento
¿Qué información básica debe contener el volante de petición que acompaña a una muestra?
Datos del paciente.
Tipo de muestra.
Fecha y hora de la toma.
Condiciones de conservación.
Sospecha diagnóstica.
Si el paciente recibe tratamiento antibiótico.
¿Qué pasos previos se deben seguir con una muestra líquida antes de la siembra?
Verificar la correcta identificación de la muestra y su concordancia con el volante de petición.
Evaluar el aspecto macroscópico (color, turbidez, sedimento).
Homogeneizar la muestra suavemente.
Trabajar bajo condiciones de asepsia.
En caso requerido, concentrar la muestra mediante centrifugación.
¿Cuál es la temperatura y el tiempo máximo recomendado para la conservación de la mayoría de las muestras antes de procesarlas? Generalmente 4 ºC para muestras líquidas y -20 ºC para heces, procesándose lo antes posible.
Menciona tres materiales comunes utilizados para realizar la siembra. Asa de siembra, pipeta e hisopo.
¿Cuál es la técnica de siembra por «estría en superficie» y cuál es su objetivo? Es una técnica en la que la muestra se distribuye sobre la superficie de un medio sólido mediante estrías sucesivas con un asa bacteriológica. Su objetivo es diluir progresivamente el inóculo para obtener colonias aisladas y facilitar la identificación.
¿Cómo se realiza la siembra en un medio semisólido en tubo? Se introduce una aguja bacteriológica estéril cargada con la muestra en forma recta hasta el fondo del medio y se retira siguiendo el mismo trayecto (siembra por picadura).
¿En qué consiste la técnica de siembra por «inundación»? Consiste en cubrir completamente la superficie del medio sólido con la muestra líquida, dejándola en contacto por un tiempo y eliminando el exceso. Se emplea cuando se desea un crecimiento uniforme.
¿Qué es la siembra en «césped» o «tapiz» y para qué se usa comúnmente? Es una siembra homogénea sobre toda la superficie del agar mediante un hisopo estéril. Se usa comúnmente para realizar antibiogramas.
¿Qué diferencia hay entre la siembra por vertido en placa y la siembra en superficie?
Vertido en placa: La muestra se mezcla con agar fundido y luego se solidifica, permitiendo crecimiento dentro y sobre el agar.
Siembra en superficie: La muestra se deposita sobre el agar ya solidificado, creciendo solo en la superficie.
¿Qué condiciones ambientales deben controlarse durante la incubación de los cultivos? Temperatura, atmósfera (aerobia, anaerobia o con CO₂), tiempo de incubación y, en algunos casos, humedad.
¿Qué es un microorganismo anaerobio estricto? Es aquel que no puede crecer en presencia de oxígeno y puede incluso morir si se expone a él.
¿Para qué se utiliza una jarra de anaerobiosis? Se utiliza para crear un ambiente libre de oxígeno que permita el cultivo de microorganismos anaerobios.
¿Qué características deben observarse en la descripción macroscópica de una colonia? Tamaño, forma, borde, elevación, color, superficie, consistencia, brillo, opacidad y, cuando aplica, hemólisis.
¿Qué indica la presencia de una zona clara alrededor de una colonia en Agar Sangre? Indica hemólisis beta, es decir, la lisis completa de los eritrocitos.
¿Qué es el recuento de microorganismos y para qué sirve? Es la determinación del número de microorganismos viables en una muestra. Sirve para evaluar la carga microbiana, control de calidad y estudios clínicos o ambientales.
¿Qué significa la sigla UFC? Unidades Formadoras de Colonias. Representa el número mínimo de células separables sobre la superficie del agar que da lugar al desarrollo de una colonia visible.
¿En qué consiste el método de recuento por filtración de membrana? Consiste en filtrar un volumen de muestra a través de una membrana que retiene los microorganismos, la cual luego se coloca sobre un medio de cultivo para su crecimiento y recuento.
¿Qué mide la turbidimetría en un cultivo líquido? Mide la capacidad que presentan las bacterias para absorber o reflejar la luz (densidad óptica). Es indispensable que la suspensión sea uniforme.
¿Para qué se utiliza la cámara de Neubauer en microbiología? Se utiliza para el recuento directo de células microbianas en una suspensión líquida mediante observación microscópica.
¿Qué es el método del Número Más Probable (NMP)? Es un método estadístico que se utiliza para estimar la concentración de microorganismos viables en una muestra líquida, basándose en diluciones seriadas y la probabilidad de crecimiento.
